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蛋白质浓缩
浓缩
生物大分子在制备过程中因为过柱纯化而样品变得很稀,为了保存和判定的意图,往往需求进行浓缩。常用的浓缩办法的:
减压加温蒸腾浓缩
经过下降液面压力使液体沸点下降,减压的真空度愈高,液体沸点降得愈低,蒸腾愈快,此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。
空气活动蒸腾浓缩空气的活动可使液体加快压敏胶用环氧固化剂蒸腾,铺成薄层的溶液,外表不断经过空气流;或将生物大分子溶液装入透析袋内置于冷室,用电扇对准吹风,使透过膜外的溶剂不沁蒸腾,而到达浓缩意图,此法浓缩速度慢,不适于很多溶液的浓缩。
冰冻法生物大压敏胶用环氧固化剂分子在低温结成冰,盐类及生物大分子不进入冰内而留在液相中,操作时先将待浓缩的溶液冷却使之变成固体,然后缓慢地融解,运用溶剂与溶质融点介点的不同而到达除掉大部分溶剂的意图。如蛋白质和酶的盐溶液用此法浓缩压敏胶用环氧固化剂时,不含蛋白质和酶的纯冰结晶浮于液面,蛋白质和酶则集中于基层溶液中,移去上层冰块,可得蛋白质和酶的浓缩液。
吸收法经过吸收剂直接纳除掉溶液中溶液分子使之浓缩。所用的吸收剂必需与溶液不起化学反应,对生物压敏胶用环氧固化剂大分子不吸附,易与溶液分隔。常用的吸收剂有聚乙二醇,聚乙稀吡咯酮、蔗糖和凝胶等,运用聚乙二醇吸收剂时,先将生物大分子溶液装入半透膜的袋里,外加聚乙二醇复盖置于4度下,袋内溶剂渗出即被聚乙二醇敏捷吸去,聚乙二醇被水饱满后要更换新的直至到达所需求的体积。
超滤法超滤法是运用一种特别的薄膜对溶液中各种溶质分子进行挑选性过滤的办法,不液体在必定压力下(氮气压或真空泵压)经过膜时,溶剂和小分子透过,大分子受阻保存,这是近年来发展起来的新办法,最适于生物大分子尤其是蛋白质和酶的浓缩或脱盐,并具有成本低,操作便利,条件温文,能较好地坚持生物大分子的活性,回收率高级长处。使用超滤法关键在于膜的挑选,不同类型和标准的膜,水的流速,分子量截止值(即大体上能被膜保存分子最小分子量值)等参数均不同,有必要依据工作需求来选用。别的,超滤设备方式,溶质成份及性质、溶液浓度等都对超滤作用的必定影响。Diaflo超滤膜的分子量截留值
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